siRNA轉原代肌腱細胞轉染試劑

一、產(chǎn)品說明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、品牌

ZETA LIFE

2、包裝規(guī)格

貨號：AD600075

規(guī)格：0.75ml

3、儲存條件

常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復凍融。

二、使用說明：

1、材料準備

RNA 濃度 20 uM /L

質粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉染。

核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉染 24 小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉染過程中不用換液。

分析結果：質粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。

三、注意事項：

1、質粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質粒轉染效率會下降 80%左右，甚至會轉染失敗。

2、質粒必須去除內(nèi)毒素，內(nèi)毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性，會導致轉染效率下降 70%-80%左 右，甚至導致轉染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質粒提取試劑盒）。

3、復合物的制備過程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進行了稀釋會導致轉染失。

4、轉染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養(yǎng)板。

5、轉染 24 小時后進行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉染 4-6 小時后換液。

6、原代細胞、免疫細胞轉染時，細胞基礎培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。

四、各品牌轉染試劑類型與Zeta Life轉染試劑的差異比較：

1、Thermo品牌Lipo 2000采用陽離子脂質體，需要更換培養(yǎng)基；特點是毒性大；轉染前后需要更換培養(yǎng)基；可以轉染質粒DNA、siRNA（效果差）。

2、Thermo品牌Lipo 3000采用陽離子脂質體，需要更換培養(yǎng)基；特點是相比Lipo 2000毒性略??；轉染前后需要更換培養(yǎng)基；可以轉染質粒DNA、siRNA（效果較差）。

3、Thermo品牌RNAiMAX采用陽離子脂質體，需要更換培養(yǎng)基；特點是專門用來轉RNA，對于細胞系的轉染效率一般，對干細胞和神經(jīng)原代細胞轉染效果差。

4、Promega品牌FuGENE 6采用脂質混合體、特定緩沖液，需要更換培養(yǎng)基；特點是本質還是脂質體；只能轉DNA；含有微量動物源成分，適用細胞種類因此受限；轉染前后需要更換培養(yǎng)基；親塑性，轉染效率會因使用PE管（塑料管）而大打折扣。

5、Roche品牌FuGENE HD采用脂質混合體、特定緩沖液，需要更換培養(yǎng)基；特點是本質還是脂質體；只能轉DNA；親塑性，轉染效率會因使用PE管（塑料管）而大打折扣。

6、Zeta Life品牌Advanced系列采用新型工業(yè)材料，不需要更換培養(yǎng)基；特點是不需要換液，無細胞毒性，轉染效率高，適用細胞種類多，可轉染質粒DNA、siRNA及小動物活體轉染。

siRNA轉原代肌腱細胞轉染試劑各規(guī)格：

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600025        0.25ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600050        0.5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600075        0.75ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600150        1.5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600500        5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD601000        10ml