五个闺蜜的疯狂互换春雨医生,性兴奋流出来白色粘稠液体,蜜桃色欲av久久无码精品,岳的大肥屁熟妇五十路99

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法

    消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法

    發(fā)布時間: 2023-06-28  點(diǎn)擊次數(shù): 1254次
    非特異性擴(kuò)增,即進(jìn)行 PCR 所擴(kuò)增出來的條帶不是所要的,引物與模板在非目的條帶處有錯配,導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體,即引物在退火過程中產(chǎn)生了 hairpin 結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu),或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合,也同樣會產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。PCR 產(chǎn)物都是通過引物延伸產(chǎn)生的。當(dāng)引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物之后,引物本身就無法再延伸形成 PCR 產(chǎn)物了,這樣的情況下,非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物越是多,那目的產(chǎn)物就越是少。如果在 qPCR 過程中,就會在熔解曲線中形成雙峰。

    消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法:
    1、引物設(shè)計的過程中要用 Primer premier 5.0 來驗證一下二聚體;
     
    2、 引物合成后,先做一次梯度 PCR,檢測最合適的退火溫度,一般高退火溫度可以提高引 物對模板的特異性從而降低引物二聚體;
     
    3、 降低 Mg2+濃度,鎂離子濃度高,會導(dǎo)致大量的非特異性擴(kuò)增,但是沒有鎂離子的話,也會導(dǎo)致 Taq 酶的失活;
     
    4、降低 dNTP 濃度,dNTP 也是非特異性擴(kuò)增的一個罪魁禍?zhǔn)?,降低它的濃度,也能有效降低二聚體及其他非特異性擴(kuò)增;
     
    5、降低引物濃度,一般的 PCR 引物都是過量的,降低了引物濃度自然也能降低引物之間形成二級結(jié)構(gòu)的可能性;
     
    6、提高退火溫度,這個道理很簡單,引物的退火溫度提高,引物間的二級結(jié)構(gòu)形成可能性就會降低;
     
    7、延長退火時間,這個也可以減弱引物間結(jié)合的可能性;
     
    8、DMSO 及甜菜堿,這些 PCR 促進(jìn)劑,主要是用于 CG 含量高的模板上,降低 DNA 的二級結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,但根據(jù)經(jīng)驗,加入 DMSO 之后需要同時提高一點(diǎn)退火溫度來補(bǔ)平(qPCR 不太適用);
     
    9、熱啟動法,通過 95℃的高溫?zé)釂?,高溫解鏈,使得引物間的二級結(jié)構(gòu)破壞,以此降低二聚體產(chǎn)生。


    深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


產(chǎn)品中心 Products
无码国产色欲xxxx视频| 国产精品国产精品国产专区不卡| 秋霞影视欧美高清av片| 久久日产一线二线三线| 少妇与大狼拘作爱性a片| 40熟妇疯狂做受xxxx高潮| s货c货大声点| 艳mu1一6全集在线播放| 熟女av| 乌克兰极品少妇xxxx做受| 久久久久久久人妻无码中文字幕爆| 被夫の上司に犯波多野结衣| 欧美亚洲一区二区三区| gogo人体| 国产亚洲精品久久久久久国模美| 疼死了大粗了放不进去| 日本yokogawa| 精国产品一区二区三区a片| 狂c亲女的文h| 老太爷的春桃乳妓h| 嫩草伊人久久精品少妇av网站 | 脱警花警服露大白乳| 亚洲av色香蕉一区二区三区| 午夜福利理论片在线观看 | 国产人与zoxxxx另类| 国产精品无码一区二区三区 | 免费一对一真人视频app| 久久久久国产精品| 国产精品毛片久久久久久久| 人妻少妇屁股翘水多| 色戒完整版无删减158分钟HD| gogo全球专业高清摄影| 日日碰狠狠躁久久躁少妇熟女人妻 | 香港a片| 妺妺第一次啪啪好紧| 久久综合亚洲色HEZYO国产| 漫漫漫画免费版在线阅读| 一区二区视频| 人妻熟人中文字幕一区二区| 亚洲色偷精品一区二区三区| 日韩乱码人妻无码中文字幕久久|